多克隆抗體和單克隆抗體的區(qū)別詳解

多克隆抗體和單克隆抗體的區(qū)別：

什么是單克隆抗體?

Monoclonal-Antibodies-Icon/單克隆抗體定義:

單克隆抗體是僅與目標(biāo)抗原某一特定表位結(jié)合的單一抗體

單克隆抗體的制備

單克隆抗體制備時(shí)首先要將免疫原注射到宿主動(dòng)物體內(nèi)，當(dāng)免疫原誘發(fā)宿主產(chǎn)生免疫反應(yīng)，脾臟就會(huì)產(chǎn)生大量不同種類(lèi)的B-細(xì)胞。此時(shí)單一的B-細(xì)胞被提取出來(lái)，與骨髓瘤細(xì)胞雜交 （癌癥B-細(xì)胞）。

之所以要將B-細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞雜交，是因?yàn)榻】嫡５钠⒓?xì)胞無(wú)法在細(xì)胞培養(yǎng)基無(wú)限存活，而與骨髓瘤細(xì)胞雜交形成雜交瘤細(xì)胞后，該細(xì)胞就成為永生化胞株，不斷產(chǎn)生抗體。

單一B-細(xì)胞從脾臟中分離，形成雜交瘤細(xì)胞后，產(chǎn)生的抗體就是單一抗體，只與目標(biāo)抗原上某一特定的表位反應(yīng)。

每一個(gè)雜交瘤生產(chǎn)出單一的單克隆抗體，這個(gè)雜交瘤就被賦予一個(gè)克隆號(hào)，以此來(lái)方便辨別這個(gè)特異的抗體是識(shí)別哪一個(gè)特定的表位。

B-細(xì)胞將單克隆抗體分泌至細(xì)胞培養(yǎng)基中，然后提取出來(lái)做后續(xù)的檢測(cè)和純化。

一旦單克隆抗體雜交瘤克隆生成，該克隆就十分穩(wěn)定，可以重復(fù)使用，這就確保了每一批次的抗體是wan全一致的。

雜交瘤也可以被注射到小鼠的腹腔中大量生產(chǎn)，雜交瘤分泌富含抗體的一種液體，被稱(chēng)作腹水，用注射器抽取，就可獲得大量的單克隆抗體。

單克隆抗體適用于:

檢測(cè)單一抗原

檢測(cè)蛋白質(zhì)家族的單一成員

不同實(shí)驗(yàn)/批次的結(jié)果穩(wěn)定一致

細(xì)胞染色背景較低-很適用于IHC、ICC、IF等應(yīng)用

量化蛋白質(zhì)表達(dá)（例：流式或熒光細(xì)胞分選）

探測(cè)分子結(jié)構(gòu)變化

探測(cè)磷酸化狀態(tài)變化

為X射線(xiàn)晶體學(xué)探測(cè)目標(biāo)

免疫治療

單克隆抗體不建議用于:

根據(jù)同源性檢測(cè)不同物種的目標(biāo)蛋白

檢測(cè)濃度較低的目標(biāo)蛋白

檢測(cè)形態(tài)變化了的蛋白

什么是多克隆抗體?

Polyclonal-Antibodies-Icon/多克隆抗體定義

多克隆抗體是與目標(biāo)蛋白上多種不同表位結(jié)合的多種不同抗體。

多克隆抗體制備

多克隆抗體的第一步和單克隆抗體一樣，都是將免疫原注射到宿主體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，激活了多種B細(xì)胞。不同的是免疫過(guò)后，多克隆抗體就直接從免疫宿主的血清中分離出來(lái)，或純化，沒(méi)有與骨髓瘤細(xì)胞融合的過(guò)程。一旦宿主動(dòng)物死亡，需要免疫新的動(dòng)物，這時(shí)血清中的抗體就會(huì)有所不同。

根據(jù)制備方法的不同，功能自然也就有所不同了。雖然多抗每批次有輕微差別，但是因?yàn)樗R(shí)別的表位多，這個(gè)差別影響并不算太大，而單克隆抗體雖然價(jià)格偏高，可是特異性更強(qiáng)更穩(wěn)定。

多克隆抗體適用于:

檢測(cè)有高同源性的抗原的已知或未知同種型

檢測(cè)濃度較低的抗原

捕獲盡可能多的抗原（例：IP或ChIP）

檢測(cè)變性的蛋白

檢測(cè)可能發(fā)生了糖基化或形態(tài)變化的目標(biāo)蛋白

用多種檢測(cè)方法檢測(cè)一種原蛋白時(shí)

檢測(cè)pH和鹽度不同的溶液中的目標(biāo)蛋白

多克隆抗體不建議用于:

量化檢測(cè)，例：流式。由于不同表位的結(jié)合導(dǎo)致信號(hào)被放大加強(qiáng)，可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確

當(dāng)高同源性蛋白的交叉反應(yīng)會(huì)引起問(wèn)題時(shí)

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