檢測炎癥小體的激活及監測方法

炎癥小體的激活有多個重要的特征，如ASC斑點的形成、促炎性細胞死亡、具有生物活性的IL-1β/18細胞因子的分泌以及HMGB1的表達。為了檢測這些關鍵的特征，InvivoGen開發了體外研究炎癥小體激活中最-常-用的人源THP-1單核細胞系模型和廣泛用于報告系統的人源HEK293胚胎腎細胞系所衍生的細胞工具。

檢測炎癥小體激活的方法

1.使用RT-qPCR檢測NF-κB誘導的pro-IL-1β和NLRP3上調

2.使用熒光顯微鏡或流式細胞術監測細胞系中ASC斑點的形成

3.使用 Western blot 檢測 caspase-1 的裂解或 pro-IL-1β/IL-18 的成熟

4.使用ELISA測定IL-1β、IL-18或HMGB1的釋放

5.使用乳酸脫氫酶（LDH）測定或碘化丙啶（PI）染色法檢測細胞焦亡

6.使用檢測IL-1β、IL-18分泌的報告細胞系

以上方法各有利弊，可以適當的結合這些方法來檢測炎癥小體的激活。

實時監測ASC斑點

THP1-ASC-GFP Cells

THP1-ASC-GFP細胞可通過熒光顯微鏡觀察活細胞中ASC斑點的形成。它們以依賴NF-κB的方式穩定表達ASC::GFP融合蛋白。在誘導劑如Poly(dA:dT)的刺激下，炎癥小體的激活可以通過觀察熒光ASC斑點的組裝來分析，不會干預炎癥小體的應答。

監測細胞焦亡

THP1-HMGB1-Lucia™ Cells

THP1-HMGB1-Lucia™細胞是一種可靠、方便的定量檢測細胞焦亡的工具，能取代測定LDH活性的經典方法。此測定依賴于細胞溶解介導的HMGB1警報素，通過與Lucia熒光素酶的融合來測量其釋放。THP1-HMGB1-Lucia™細胞經LPS啟動和炎癥誘導劑如Poly(dA:dT)處理后引發細胞焦亡，從而釋放HMGB1::Lucia到細胞外環境中。通過測量QUANTI-Luc™檢測試劑產生的光信號，可以簡單監測上清液中HMGB1::Lucia的水平。

實時監測IL-1β和IL-18的分泌

InvivoGen已開發出報告細胞系，能簡單、快速、可靠地檢測和定量具有生物活性的人源（h）或鼠源（m）IL-1β和IL-18。這些細胞來源于人源胚胎腎HEK293細胞系。在激活細胞因子信號通路后，它們表達由NF-κB/AP-1誘導的分泌型堿性磷酸酶（SEAP）報告基因。使用QUANTI-Blue™溶液檢測試劑可以很容易地監測上清液中的SEAP水平。

HEK-Blue™ IL-1β Cells& HEK-Blue™ IL-1R Cells

這些細胞可以監測樣本中的hIL-1α/β、mIL-1α/β。兩種細胞系均表達內源性人源IL-1受體（hIL-1R）。HEK-Blue™ IL-1β細胞對人源IL-1異構體的敏感性高于鼠源的異構體。我們建議使用此細胞系來進行人源炎癥小體細胞實驗(例如THP1衍生分析，見第6-7頁)，測試上清液樣本。HEK-Blue™ IL-1R細胞被穩定轉染表達mIL-1R，賦予對mIL-1β更高的敏感性。因此，該細胞系更適合于從小鼠的血清或細胞突變物中檢測IL-1β。然而，它們的高靈敏度可以導致一些細胞（例如RAW264.7衍生細胞）出現高背景。

值得注意的是，這兩種細胞系都可以用來評估樣本中IL-1α警報素的水平。HEK-Blue™ IL-1β 和 HEK-Blue™ IL-1R細胞檢測一種亞型的特異性可通過在分析中加入針對另一種亞型的中和抗體來評估。

HEK-Blue™ IL-18 Cells

這些細胞提供了一個強大的細胞實驗平臺，監測樣本中hIL-18和mIL-18的濃度。HEK-Blue™ IL-18細胞經轉染穩定表達hIL-18受體。這些細胞對hIL-18比mIL-18敏感。

使用Invivogen的細胞因子傳感器細胞

1.檢測具生物活性的細胞因子

2.具成本效益

3.短時間的實驗操作

4.肉眼可視化實驗結果

5.高靈敏度、高動態范圍

6.適用于藥物篩選（正?；蚋咄亢Y選、藥物效應動力學等）

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文獻參考：

Martine P. et al. 2019. Cell Death Dis. doi: 10.1038/s41419-019-1491-7. HSP70 is a negative regulator of NLRP3 inflammasome activation.

Metho S. et al. 2019. Mol. Cell. doi: 10.1016/j.molcel.2018.11.08. The Crohn’s disease risk factor IRGM limits NLRP3 inflammasome activation by impeding its assembly and by mediating its selective autophagy.

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