在ELISA實(shí)驗(yàn)中，研究人員需要進(jìn)行多次加樣步驟完成實(shí)驗(yàn)操作。對(duì)于常規(guī)雙抗體夾心法ELISA，一般有如下加樣步聚，即加樣本、加檢測(cè)抗體、加酶結(jié)合物、加底物（最后加終止液停止反應(yīng)）。

加樣步驟基礎(chǔ)知識(shí)

加樣步驟中一般使用微量加樣器（移液器，移液槍），按照實(shí)驗(yàn)規(guī)定的用量將液體成分加入酶標(biāo)板孔板中。每次加入新的液體組分前，應(yīng)更換新的吸頭，以免液體組分間發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。部分加樣步驟需使用稀釋后的液體組分，如標(biāo)準(zhǔn)品需要經(jīng)復(fù)溶倍比稀釋后上樣，抗體、濃縮酶結(jié)合物需稀釋為1×工作液，需要按照說明書的稀釋要求，預(yù)先在試管、EP管等中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。

加抗體、酶結(jié)合物工作液和底物工作液時(shí)，可用定量多道加液器，節(jié)省加樣的時(shí)間和操作，更好地保證孔與孔間的平行，減少因操作帶來的誤差。

在ELISA中，一般需進(jìn)行45加樣。“45加樣"是什么？

45加樣，應(yīng)當(dāng)為45度加樣，即加樣槍的吸頭所在的直線應(yīng)當(dāng)與板條所在的直線呈45度角，吸頭貼著孔壁加入。

? 吸取樣品時(shí)，加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體；加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，因?yàn)檫@樣操作會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確。

? 吸頭所在的直線與板條所在的直線所呈角度不可過小，會(huì)使液體殘留在酶標(biāo)板孔的孔壁上，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確。

? 不要將吸頭伸入孔底，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面吸頭浸入液面下容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確。

以上為ELISA實(shí)驗(yàn)中加樣tips的全部?jī)?nèi)容，您學(xué)會(huì)了嗎？

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